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荧光原位杂交(FISH)技术的应用与实验流程
点击次数:1507 发布日期:2019-3-6  来源:本站 仅供参考,谢绝转载,否则责任自负
荧光原位杂交(FISH)技术的应用与实验流程
分子诊断是诊断市场增长最快的部分。萤光原位杂交和FISH分析包括700万人口的5亿美元的市场。。FISH市场预计为11%,较去年同期成长为下一个五年。400至500万人口的市场,在美国产生。FISH测试是用?#35789;?#21035;生物标记DNA / RNA的形式。它是用于遗传作图和基因表达分析公知的方法。这种技术使用荧光染料标记的探针,并?#25104;?#21040;一个染色体或帧内核DNA,以产生在原位通过显微镜观察荧光信号的核苷酸序列。它是如细胞离心涂片(细胞悬浮液),然后触摸用制剂或福尔马林固定的新?#25163;?#21058;进行的,?#37096;?#20197;使用石蜡包埋的(FFPE)组织中。它主要用于以下领域研究和临床诊断:
•产前诊断
•癌症诊断
•出生缺陷的分子细胞遗传学和精神发育迟滞
•染色体异常
•临床遗传学
•神经科学
•生殖医学
•毒理学
•微生物生态学
•进化生物学
•比较基因组学
•细胞基因组学
•区分良性和恶性肿瘤
这个市场的多数是试剂包括FDA批准测试,伴随诊断,研究仅使用探测器,定制试剂探针和支持和供应。有必要进行杂交执行这些劳动密集型的测试设?#28014;?#29702;解需要杂交过程设备要求必须清晰地定义。
必要的设备如下:
——酸度计
——天平
——搅拌盘
——微离心机
——冰箱
——冷冻
组织准备要求:
——切片机
——水浴
——原位杂交箱
执行FISH过程将需要下列设?#36127;?#26448;料除了试剂:
——载玻片干燥机
——水浴
——原位杂交炉
——Coplin罐
——盖玻片
——染色皿
——橡胶?#26680;?可选:取决于设备使用)
——荧光显微镜DAPI过滤器(蓝色),FITC过滤器(绿色),德州红色过滤器摄影的能力
FISH的过程——简化
样品准备——depariffinization、脱水、空气干燥,预处理(95 C @ 30分钟,Coplin Jar),蛋白酶治疗(37°C 10 - 20分钟,Coplin Jar),脱水,空气干燥,马克,适用FISH类探测器,
用水泥覆盖玻璃
变性 - 5分钟@ 75°C(45 - 50℃,中期扩展+额外的步骤,以变性探针)杂交 - 37℃,16小时 - 72小时
贴标过程
直接标记 - 标签结合到探针和它是较不敏感的
间接标记 - 检测之前附加步骤,用抗体,结果放大单检测探头
存储 - 4 - 8°C长达两个月的时间,在黑?#30331;?#22495; - 感光
关键的流程步骤
在FISH的过程分为两个步骤需要的设备用于加热的幻灯片;所述变性步骤和杂交。这些步骤是最FFPE FISH程序相似。
变性:变性的探针和双链DNA
平均时间:5分钟
标准温度:75℃
杂交:探针杂交到靶核酸
时间范围:16 - 72小时
标准温度:37℃
已经孵育好的幻灯片必须储存在4 - 8°C,直到他们在显微镜下进行拍摄。他们可以在这些温度储存数月之久。
上海书俊仪器设备有限公司代理美国Boekel原位杂交产品,了解更多信息,请联系021-64825207/010-83659476/020-82528560进行咨询或转接。
24小时咨询热线:13401157194 王经理

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